• <button id="tuvkm"><acronym id="tuvkm"></acronym></button>
  • <button id="tuvkm"><acronym id="tuvkm"></acronym></button><button id="tuvkm"></button>

  • <progress id="tuvkm"></progress>
  • 服務熱線:4008-013-053/021-51870610  
    新聞中心您的位置:網站首頁 >新聞中心 >明膠酶譜試劑盒操作步驟
    明膠酶譜試劑盒操作步驟
    發布時間:2020-10-14   點擊次數:40次

    明膠酶譜試劑盒操作步驟

    1 制備含MMP底物蛋白的SDS-PAGE凝膠:推薦分離膠濃度為8%。按照標準程序制備SDS PAGE凝膠。將10 × substrate G 融化,并90 ºC 加熱5分鐘。分別在濃縮膠和分離膠中額外加入10 × substrate G 并使之稀釋10倍,混勻后加入過硫酸銨和TEMED,等待凝膠聚合。

    2 待測樣品1:1 稀釋于2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可自行配制:4% SDS, 100 mM Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue),混合后直接上樣。切勿加熱變性,并且僅使用不加還原劑的上樣緩沖液??赏ㄟ^預試驗確定加樣量,使用普通蛋白預染Marker 即可。

    陽性對照(可選步驟):可取人、小鼠、大鼠或兔100μl 全血與100μl 2 × SDS-PAGE nonreducing buffer 等體積混合,取5-15μl 上樣。

    注:因為全血成分復雜,MMP活性較低,好的方法是將全血中白蛋白進行分離做陽性對照

    3 低電流恒流電泳,每一塊小膠電流為20 mA/gel。溴酚藍跑出凝膠前沿時結束電泳。

    4 洗滌凝膠:取出凝膠,去除濃縮膠,放入容器內??上扔眠m量蒸餾水沖洗凝膠,然后加入10 ml 1× Buffer

    A(用蒸餾水稀釋),室溫漂洗凝膠2 × 18小時。中間換液。

    5 孵育:倒掉Buffer A。加入10 ml 1× Buffer B(蒸餾水稀釋),室溫或37ºC 孵育1~5 小時。陽性對照或者血中的MMP 通常37ºC 孵育1 小時即可顯示。如MMP 活性低,應延長孵育時間為10小時或過夜。

    6 顯色:倒掉Buffer B,加入SDS-PAGE凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液(操作步驟見后面所附SDS-PAGE凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液說明書)。凝膠的大部分區域被深染,在有MMP 條帶的位置不被染色而形成透亮區域。

    透明區域的位置和范圍指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。陽性對照將在66~72 (MMP-2)、92 (MMP-9)、130 (proMMP-9)、225 (proMMP-9) kDa位置出現透明條帶。

    7 條帶掃描:將凝膠放在掃描儀上掃描。雖然MMP條帶透明,但凝膠背景并非真正全黑。解決辦法:可用非透射光掃描,或用軟件圖像處理程序調整背景顯示為灰度顯示,并盡量設置為黑色。MMP 條帶則為白色,這種背景黑條帶白的格式是英文論文中常見的格式。

    明膠酶譜試劑盒操作步驟 

    国产破外女出血视频-东京热加勒比高清无线-AV资源每日更新网站-国产私拍福利精品视频 三级片大全| 国产自拍在线| 多P| 欧美a级片| 在线看日本十八禁网站| 国产破外女出血视频| 年轻人影院| 甜性涩爱在线观看| 8090| 刘嘉玲被强奸| 亚洲欧美另类无码专区| 天天看片| 老女老肥熟国产在线视频| a级| 婷婷五月丁香| 日本一道高清视频二区| 亚洲精品国产自在现线| 色综合视频一区二区| 美女被强奸| 一本久道久久综合久久鬼色| 黄色网站网址| 午夜嘿嘿嘿在线观看| 黑粗硬大欧美在线视频| 国产乱子伦在线播放| 吉泽明步电影| 亚洲 欧洲 日产 韩国| 苍井空影院| 日本道二区高清视频| 欧美专区| 青草青草久热精品视频| 美女视频黄频a美女大全| 俄罗斯美女初次视频| 免费可以看黄的视频| 日本一区二区| 男人和女人特黄的视频| 欧美人与禽交片欧美| 欧美人成毛片在线视频| 日本理论日本电影| 1939午夜电影| 久久免费视频| <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链>